Оптимизиране на ултразвукова екстракция на сапонини от листата на Tribulus

15 февруари 2011

Оптимизиране на ултразвукова екстракция на сапонини от листата на Tribulus terrestris L. и тяхното HPLC-DAD-ESI-MSn профилиране, противовъзпалителна активност и механизъм in vitro и in vivo

Chunlian Tian a b, Yu Chang a, Ruxia Wang a, Zhiruo Kang a, Qi Wang a, Zhifan Tong a, Aohua Zhou a, Cancan Cui a, Mingchun Liu aaKey Laboratory of Livestock Infectious Diseases in Northeast China, Ministry of Education, College of Animal Science and Veterinary Medicine, Shenyang Agricultural University, No 120 Dongling Road Shenhe Dist., 110866, Shenyang Liaoning Prov., People's Republic of ChinabKey Laboratory of Molecular Pharmacology and Drug Evaluation (Yantai University), Ministry of Education, Yantai University, 264005, Yantai Shangdong Prov., People's Republic of China

Резюме:

Етнофармакологично значение

Tribulus terrestris L., като едногодишно билково растение от Zygophyllaceae, проявява много биологични активности и основните му химични съставки са сапонините. Въпреки това процесът на екстракция, химичният състав, противовъзпалителният ефект и механизмът на общите сапонини от листата на Tribulus terrestris L. все още не са ясни.

Цел на изследването

Настоящото проучване обстойно оценява процеса на екстракция, основните компоненти, противовъзпалителното действие и механизма на сапонините от листата на Tribulus terrestris L. Материали и методи:

Методите за ултразвукова екстракция и реакция на повърхността бяха приети за оптимизиране на технологията за екстракция на общите сапонини от листата на Tribulus terrestris L. и неговите състави бяха открити с метода LC-MSn. Противовъзпалителната активност на общите сапонини е изследвана чрез индуцирани от липополизахарид RAW 264.7 клетки и модели на мишки с остро белодробно увреждане.

Резултати

Параметрите на ултразвуковата екстракция на фракцията на сапонините, включително концентрация на етанол 30%, време на екстракция 55 минути, съотношение на разтворител към материал 35:1 ml/g и температура на екстракция 46 °C, бяха проверени чрез повърхностен метод на реакция със степен на екстракция 5,49%, и тридесет състава бяха открити с LC-MSn метод. Освен това фракцията на сапонини може да има по-силен противовъзпалителен ефект чрез намаляване на фагоцитната активност и белодробния оток и защита на морфологията на RAW 264.7 клетки и белодробни тъкани и намаляване на съдържанието на NO и TNF-α. Освен това беше разкрито, че общият екстракт от сапонини може да упражнява противовъзпалително действие чрез инхибиране на активирането на TLR4-TRAF6-NF-κB сигналния път.

Заключение

Тези проучвания предполагат, че сапонините от листата на Tribulus terrestris L. могат да бъдат важно противовъзпалително лекарство в клиниката.

Въведение

Tribulus terrestris L. (T. terrestris), като едногодишно тревисто растение от Zygophyllaceae, се използва широко за лечение на рак (Kim, 2011), торакопатия (Nam, 2016), кожен пруритус (Nam, 2016), очни заболявания (Nam, 2016), дисфункция на имунната система, възпаление (Mohammed, 2014), оксидативен стрес (Sailaja, 2013) и сърдечно-съдови и мозъчно-съдови заболявания (Zhang, 2010; A. Phillips, 2006).

Като лечебно растение, T. terrestris е богат на сапонини, алкалоиди и флавоноиди (Hammoda, 2013; Kang, 2014; Ma, 2017; Qari, 2017; Tian, 2019; Tian, 2019, 2019; Zheng, 2017). Фармакологичните ефекти на сапонините са обстойно проучени (Liu, 2017; Zhang, 2011), включително противовъзпалителни (Binesh, 2018; Du, 2016; Liu, 2013; Song, 2013; Xin, 2011; Xin, 2011, 2011; Yang, 2017; Zhai, 2018), имунорегулация (Dong, 2018), противотуморна (Liu, 2005), анти-стареене (Tada, 2009), защита на белите дробове и черния дроб (Du, 2011; Jiang, 2011), сърдечно-съдови и цереброваскуларна защита (Shi, 2011; Wang, 2011) и против стомашна язва (Wang, 2014).

Сапонините могат да упражнят перфектни противовъзпалителни ефекти чрез регулиране на нивото на възпалителни цитокини, намаляване на синтеза на възпалителни медиатори и повлияване на възпалителните сигнални пътища. Противовъзпалителната активност на сапониновото съединение диосгенин е систематично изследвана с LPS/IFN-y-активиран миши макрофаг в концентрация от 0,1 до 10 μM. Резултатите показват, че диосгенинът може да инхибира производството на NO, експресията на протеина и иРНК на индуцируемата синтаза на азотен оксид (iNOS) и да намали производството на реактивни кислородни видове (ROS), IL-1 и IL-6. В допълнение, индуцираната от LPS/IFN-y активност на NF-κB и AP-1 е намалена от диосгенин и CK2 активирането и фосфорилирането на c-Jun NH(2)-терминална киназа (JNK) също са блокирани (Jung, 2010). ). Нещо повече, диосгенинът играе важен полюс в подобряването на атеросклеротичната прогресия в сърцето и потискането на възпалителни медиатори в черния дроб и мозъка на плъх Wistar чрез регулиране на TNF-α, COX-2 и NF-κBp65 (Binesh, 2018). Общите сапонини на Aralia elata (Miq.) изглеждат. (TAS), извлечен може ефективно да регулира предизвиканата от възпаление съдова ендотелна дисфункция чрез подобряване на увреждането на ендотелните клетки на човешката пъпна вена (HUVEC), причинено от TNF-α. Горните резултати са тясно свързани с упражняването на цитопротективни ефекти чрез инхибиране на TNF-α-задействаната HUVEC апоптоза, деполяризация на потенциала на митохондриалната мембрана и регулиране на възпалителни фактори IL-6, MCP-1 и VCAM-1 (Zhou, 2018). Два тритерпеноидни сапонина на стипулеанозиди R1 (SP-R1) и R2 (SP-R2), изолирани и идентифицирани от P. stipuleanatus, могат да регулират надолу нивата на възпалителни медиатори, азотен оксид, малондиалдехид, TNF-α и IL-6 в тъкани на лапите (Shu, 2021). Голям брой изследвания потвърждават, че мономерно съединение или екстракт от сапонини в ниски концентрации имат добър противовъзпалителен ефект и разкриват противовъзпалителния механизъм от гледна точка на цитокини, възпалителни медиатори и сигнални пътища.

Настоящата ера се фокусира върху лекарствата с растителен произход заради тяхната ефикасност, стабилност и нетоксичен характер. Предварителният противовъзпалителен ефект на T. terrestris е докладван в някои изследвания. Екстрактът от метанол и неговата хлороформена фракция на T. terrestris (надземни части) показват по-добър инхибиращ ефект срещу оток на лапата (Mohammed, 2014). Освен това, флавоноидната фракция от листата на T. terrestris може да намали степента на подуване на ухото при мишки, стимулирани с ксилен, и да намали съдържанието на NO in vitro модел на възпаление (Tian, 2019). Освен това беше установено, че сапонините от плодовете на T. terrestris могат да играят по-силно инхибиращо действие срещу липополизахарид (LPS) стимулиран възпалителен отговор чрез намаляване на фагоцитната способност и понижаване на концентрацията на NO и TNF-α в RAW 264.7 клетки (Tian, 2020) .

В сравнение с плодовете на T. terrestris, има повече предимства за листата на T. terrestris, включително много ниска цена, по-разнообразни източници и по-високо съдържание на сапонини. Поради това е важно за по-доброто развитие и използваемата стойност на листата на T. terrestris. Като се има предвид, че сапонините са основните компоненти в листата на T. terrestris, така че всички сапонини в листата на T. terrestris имат противовъзпалителен ефект? Следователно, това изследване има за цел да оцени изчерпателно противовъзпалителния ефект на общите сапонини от листата на T. terrestris in vivo и in vitro и допълнително да разкрие неговия механизъм на действие. Нещо повече, няма систематични изследвания върху фармакодинамичната материална основа на екстракта от общи сапонини (TSE) от листата на T. terrestris. Ето защо, това изследване ще разкрие неговия метод на извличане, основните съставки, противовъзпалително действие и механизми.

Откъси от раздели

Инструменти и реактиви

Основните компоненти и съдържанието на TSE са анализирани чрез методите LC-MSn и Multimode Plate Reader съгласно доклада на Tian (2020).

Доставчиците на LPS, MTT, дексаметазон натриев фосфат, комплекти за миши TNF-α Elisa и други аналитични реагенти бяха същите като в предварителното проучване на Tian (2020). Антитела срещу TLR4, TRAF6, IκB, p-IκB, β-актин и вторични антитела бяха закупени от ABclonal (Wuhan aibo taike biological co. LTD, Китай).

Клетки и животни

RAW 264.7 клетки са закупени от Шанхай

Оптимизиране на еднофакторни експерименти

Експериментите с един фактор могат точно и обективно да изберат оптималния диапазон на ниво на различни фактори. Както е описано на Фиг. 1, TSC се увеличава с увеличаването на концентрацията на етанол (X1) от 20% до 40% и достига пикова стойност при 40%, след което започва да намалява от 40% до 100%. Въпреки това, TSC непрекъснато се подобряваше заедно с промените на времето за екстракция (X2) от 20 минути на 60 минути и се покачваше бавно повече от 40 минути. Освен това, добивът на TSE прогресивно се повишава с

Заключение

Това изследване изчерпателно изследва процеса на екстракция, основните активни съставки и възпалителната активност и механизма на TSE от листата на T. terrestris in vitro и in vivo. Параметрите на ултразвуковата екстракция са както следва: концентрация на етанол (X1) 30%, време на екстракция (X2) 55 минути, съотношение на разтворител към материал (X3) 35:1 ml/g и температура на екстракция (X4) 46 °C, и добивът на TSE е 5.49% при тези условия на екстракция. Освен това бяха анализирани тридесет композиции

« назад

Мисис Европа избра Боралин!

6 януари 2025

Победителка от 2023 е пловдивчанката Манита Вартан